F.固定液：即10% 福尔马林（甲醛）生理盐水
氯化钠 8.5g ；水 900ml ；40% 福尔马林（甲醛）100ml
2. 采样步骤
A. 如果有比较典型的 BSE 疑似牛，则要拍照或摄像留下证据。每省至少要对20%的临床疑似牛进行拍照或摄像，并且收集临床疑似牛的其他材料如档案等。采集临床疑似牛时，采样人员还需要通过问询等方式弄清该病牛的其他情况， 问询内容可以包括饲养历史、来源、 流动等情况。 这些证据材料必须存档和备份， 运送样品时一并送至检测实验室。
B.填写采样单
根据实际情况， 按采样单要求认真填写。采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。
C. 取样
（I） 电锯采样法
a.用电锯沿两牛角根部到枕骨大孔上边缘的方向将牛颅腔打开。
b.用手术刀将脑膜切开，骨钳打开颅腔，然后把脑神经和脑血管切断。
c.取出整个脑组织包括大脑、 小 脑和 脑干（间 脑、 中 脑、 脑桥和延脑）； 注意千万不要把脑干损坏。
d.将每头牛的脑组织用纱布松松地裹住（纱布容易透水）， 千万不能紧，一定要松，然后将写有编号名称的医用胶布（用圆珠笔或铅笔将编号写在上面，编号：地名 ＋ 序号 ＋ 样品类别名， 如“青岛市 10 号牛”）用棉线栓在纱布口 处，注意不让胶布脱落。处理好后放入10 - 20倍体积 10% 福尔马林生理盐水中固定一周。 注意标签编号与采样单的编号相对应。
e.用新的福尔马林生理盐水更换旧的固定液， 密封在塑料桶中， 桶外贴上桶中所有牛脑的编号， 以便我们处理牛脑时不开桶盖便可知桶中的牛脑情况。每个塑料桶可根据大小放置相应数量的牛脑。
（II） 采样勺采集法
a.准备专用的采样勺（一把或二把便可）、医用剪刀（一把）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）以及其他采样用品如采样单等。
b.戴好一次性手套和橡胶检查手套， 专门登记的人员不需要戴手套。通过观察牙齿检查牛的年龄。
c.在平整地面倒置牛头，即牛头的两角和鼻子靠地放置。
d.在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜，目的是便于插入采样勺。然后用一个食指伸入枕骨大孔中，沿着延脑转一周，目的是切断延脑与头骨之间相连的神经和血管，以便于延脑的取出。
e.从延脑腹侧（也即勺子从枕骨大孔的上面进入）将采样勺插入枕骨大孔中，插入时采样勺要紧贴枕骨大孔的腔壁，以避免损坏延脑组织。采样勺插入的深度约为 5 -7cm （采羊脑时插入深度约为4 cm），然后向上一扳勺子手柄， 同时往外抠出脑组织和勺子，延脑便可完整取出。
f.其余步骤见（I）中的d和e 。
注：对于临床疑似牛羊，采下脑后，从脑中线一分为二，一份用于甲醛固定，另 一份用 于- 20℃ 冷冻并在低温下运送至参考实验室。
3. 样品的包装与运送
A.独将采样单邮寄给检测实验室， 切不可与样品一起邮寄，目的是防止采样单被污染。
B.将固定好的牛脑放在几个大的带内盖的塑料桶中密封，注意每个牛脑都随身带有一个唯一的编号， 桶外壁上也标明桶内的所有牛脑编号。 运送时桶里的固定液可以不按 10 - 20 倍体积的量，而保留适当的量便可，适当的量是以浸没牛脑为准，不过运送时必须更换成新的固定液。
C.运输时，将装有样品的塑料桶用木架子固定好， 以防运输途中颠倒。
D.在木架子外面加两张不干胶标签，一张注明样品名称、采样单位与地址及联系电话，另一张注明放置方向、小心、易碎和切勿倒置等字样。
E.样品由专人或经航空运至检测实验室。
附件11：
羊痒病监测方案
一、监测范围
重点对放牧羊群、种羊养殖场以及屠宰场进行采样监测，采集对象为瘙痒、神经症状、 共济失调、 倒地不起、 失明、 死亡或其他症状的 18月龄以上绵羊和山羊。
二、监测时间
全年送样。瘙痒、神经症状、共济失调的样品随时送检。
三、采样单位
市动物疫病预防控制中心负责采样工作，市动物卫生监督所和各区县畜牧兽医部门配合。
采集的样品送中国动物卫生与流行病学中心国家牛海绵状脑病参考实验室进行检测。
四、采样数量 和要求
（一）各区县对县辖区内的所有羊群，尤其是种羊群以及从外国进口的羊只进行临床检查，并填写临床巡查登记表（见附录1）。临床检查频率为半年一次，间隔时间为4个月。临床巡查发现瘙痒、神经症状、共济失调的羊应及时采样送检，弱发现与痒病症状相似的病羊可立即与国家牛海绵状脑病参考实验室联系。
（二）全年采样数量为50头份。
五、检测方法
免疫组织化学方法、酶联免疫吸附（ELISA）方法、免疫印迹方法和组织病理学方法，其中 ELISA 方法为筛检方法， 免疫组织化学方法和免疫印迹方法为确诊方法，组织病理学方法为辅助诊断方法。
附录1：
临床巡查登记表
巡查人： 单位（盖章）
┌────────┬────────┬────────┬────────┬────────┐
│ 巡查时间 │ 巡查的 │ 巡查的 │ 神经症状羊数量 │ 采样数量 │
│ │ 羊群数量 │ 羊只数量 │ │ │
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附录2：
羊痒病普查采样单
样品保存条件：甲醛固定□ -18℃ 以下冷冻□ 样品类别：脑□ 淋巴结□ 脾脏□ 其他 _________
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采样地点： 省（市） 县 乡
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样品
编号
| 动物种类
| 月龄
| 性别
| 健康状况
| 备 注
（若为临床可疑， 请描述病 羊的 品 种、畜主、是否为进口等情况， 可单独附页说明）
| 临床可疑
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山羊
| 绵羊
| 正常
屠宰
| 临床
可疑
| 其他
疾病
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| 1 、发病 初期易 惊、不安、打颤、凝视，有时癫痫状发作。
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