市疾控中心定期对本市季节性流感和甲型H1N1流感监测数据进行综合分析，了解本市流感疫情的流行特征及发展趋势，并将分析结果上报市卫生局，为制定相应的防控措施提供科学依据。
3、Ⅲ级疫情
（1）监测点设置
监测点由Ⅳ级疫情时的62家医疗机构扩大为设置发热门诊的所有医疗机构和部分设置呼吸专科的医疗机构。
（2）监测内容与方法
甲型H1N1流感病例、暴发疫情；流感样病例、暴发疫情监测等监测内容、方法不变，监测报告实施“零报告”制度。
（3）监测数据分析
市疾控中心负责汇总全市的甲型H1N1流感监测数据，定期进行综合分析，掌握本市甲型H1N1流感发生发展趋势，估计甲型H1N1流感疫情形势，提出防治工作建议并上报市卫生局。
4、Ⅱ级及Ⅰ级疫情
Ⅱ级及Ⅰ级疫情时，扩大Ⅲ级疫情状态下症状和病例监测范围、监测策略与重点为病原学、疾病危害、流行强度以及医疗卫生资源需求。
（1）监测点设置
监测点扩大为本市所有的综合性医疗机构。
（2）监测内容与方法
1）甲型H1N1流感病例、暴发疫情；流感样病例、暴发疫情监测等监测内容、方法不变，监测报告实施“每日报告”制度。
2）血清学监测
采集甲型H1N1流感病例密切接触者及部分健康人群血清标本，进行甲型H1N1流感病毒的抗体检测。
3）疾病危害、流行强度监测
收集全市报告的甲型H1N1流感疑似、确诊病例和出现流感样症状的密切接触者相关资料，及时开展疾病流行特征、流行强度；发病率、死亡率等疾病危害监测与分析，研判甲型H1N1流感在本市流行趋势，提供防治工作建议。
（六）实验室检测
1．职责分工
（1）市疾控中心实验室负责对各区县流感网络实验室进行相关技术的培训，督导和质量控制。
（2）各区县网络实验室负责对辖区内流感监测哨点医院采集的流感样病例标本进行分离和鉴定，并将标本信息和结果及时录入“中国流感/禽流感监测信息系统”。
（3）各区县网络实验室负责对辖区内各级医院和相关场所出现的可疑甲型流感H1N1标本进行核酸检测，初筛阳性标本上送市疾控中心实验室复核。
2．采样对象
（1）甲型H1N1流感病例：甲型H1N1流感疑似病例和确诊病例；
（2）各哨点医院门急诊流感样病例，社区获得性肺炎住院病例；
（3）暴发疫情中的流感样病例。
3．采样和运送要求
标本的采集和运送按照《上海市预防和控制人感染猪流感工作方案（暂行）》中附件7《人感染猪流感病例实验室检测工作要求》开展。
4．检测项目、方法
（1）核酸检测：Real－time RT-PCR或RT-PCR 方法，按国家流感中心推荐的甲型H1N1流感病毒H1N1引物和探针以及其他相关流感分型引物和探针进行检测。
（2）病毒的分离培养：确诊为季节性流感病人的标本，各区县网络实验室须开展病毒的分离培养，病毒分离培养要求在BSL-II实验室。甲型H1N1流感病毒的接种要求BSL-Ⅲ实验室。
（3）血清学检测：对辖区内的健康人群流感血清抗体进行监测，以了解人群血清抗体水平。对辖区内的相关职业人群血清抗体进行监测；各网络实验室保留好本次甲型H1N1病人血清，以便日后对血清中抗体滴度进行检测。
5．检测结果的判断和报告
（1）阳性报告
1）季节性流感：通过细胞或鸡胚培养获得阳性毒株，并通过血凝抑制和PCR方法鉴定到毒株亚型。
2）甲型H1N1： A型特异性引物能够扩增出预期大小的产物，针对甲型H1N1流感病毒H1N1亚型特异性PCR扩增出预期大小的产物。流感分型特异性引物能够扩增出预期大小的产物。
（2）阴性报告
1）季节性流感：通过细胞或鸡胚培养获得未获得季节性流感的毒株。
2）甲型H1N1：甲型通用引物不能扩增出预期大小的PCR产物；新甲型H1N1流感病毒H1N1亚型特异性引物不能扩增出预期大小的PCR产物。流感分型特异性引物能够扩增出预期大小的产物。
6．实验室的质控
（1）人员培训：市疾控中心负责对各区县网络实验室相关检测人员进行统一的技术培训，包括病毒分离、血清学和分子生物学。
（2）能力考核：市疾控中心每年至少一次对网络实验室进行流感监测和检测得能力考核。并将考核结果及时反馈给各网络实验室的相关负责人员。
（3）试剂发放：各网络实验室每年用到的标准血清、抗原以及针对每年季节性流感的引物探针均由国家流感中心统一配给。
（4）实验室督导：市疾控中心对各网络实验室的仪器、操作、人员、环境等各因素不定期进行督导检查。
7．实验室生物安全要求和人员防护措施
在进行季节性流感的分离培养和鉴定过程中，所有的操作均在BSL-II实验室进行。在进行甲型H1N1流感标本的检测过程中，人员按照BSL-Ⅲ进行防护。
五、附件
1. 网络实验室甲型H1N1流感标本检测流程图
2．甲型H1N1流感病毒和季节性流感病毒实验室基本要求
六、附表
附表1：上海市甲型H1NI流感监测点一览表
附表2：流感样病人（ILI）门、急诊病例登记表
附表3：上海市___区县___医院流感（甲型H1N1流感）监测报表
附表4：甲型H1NI流感病例个案调查表（略）
附表5：集聚性流感样病例调查一览表
附件1网络实验室甲型H1N1流感标本检测流程图（略）
附件2
甲型H1N1流感病毒和季节性流感
病毒实验室基本要求
一、实验室环境
1．必须配备生物安全二级实验室三间，分别用于细胞培养，季节性流感病毒分离，核酸检测时样品的处理。每间实验室至少要求 A1型或A2型二级生物安全柜一台。
2．专用的核酸检测实验室：实验室须设置试剂储存和准备区，标本制备区，扩增反应混合物配置和扩增区及扩增产物分析区。各区域应满足合理、独立分区和按照单一方向进行的要求。
二、季节性流感病毒分离、培养和鉴定的专用仪器设备要求
恒温培养箱两台：分别用于正常鸡胚培养和鸡胚病毒分离。
普通冰箱4台：分别用于细胞培养试剂的保存，鉴定试剂的保存、样品的短暂保存和病毒分配培养物的短暂保存。
-70℃冰箱：用于病毒和样品的长期保存。
CO2培养箱两台：分别用于细胞和病毒分离的培养。
高、低速离心机各一台：分别用于细胞、血清和标本的分离。
倒置显微镜两台：分别用于观察细胞和细胞病变。
液氮罐一个：用于细胞长期保存。
恒温水浴箱二台：用于血清灭活 （灭活温度为56℃）。
细胞计数板、混匀器和检卵灯各一件：分别用于培养细胞计数、液体和血凝板的混匀和病毒的鸡胚分离培养。
微量移液器：100～1000（μl）6把，20～200（μl）6把，2～20（μl）6把，12或8道移液器4把，分别用于标本处理，血凝及血凝抑制试验用。
