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推荐检测质粒上的保护性抗原基因（pag），荚膜形成基因（cya）和染色体上的炭疽杆菌特异基因（ropB）。推荐的引物序列为：pag：F：5’-ATTTGCGGTAACACTTCACT-3’，R：5’-AGACCGTGACAATGATGGAA-3’；cya：F：5’-CGGATTGTATATGGAGTGGG-3’，R：5’-GGGACAGGAATGTTTGGATC-3’；ropb：F：5’-GTACGCCAATCGATATCATG-3’，R：5’-GATCATCGTCATCTTCCGTA-3’。PCR反应体系为50μl，包括下列成分：10×反应缓冲液，5μl；4×dNTP混合物（每种2.5mM），4μl；引物（上游），1μl，引物（下游），1μl；内部对照模板，1μl；待测模板，1μl；无菌去离子水，36.75μl；TaqDNA聚合酶，1ｕl；反应条件：95℃预变性5min，1个循环，之后95℃1min，55℃1min，72℃1min。30个循环。最后72℃延伸5min。结果分析：采用常规琼脂糖凝胶电泳，读胶仪检测。由于PCR技术有时会出现交叉污染和假阳性反应，应采取抗污染的PCR扩增方法，并对检测结果进行必要的PCR产物序列测定，以排除污染。
[标本采集时注意事项]
此操作规范应在生物安全二级实验室内进行。采集的标本不得用解剖的方式获取。所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。尽可能在抗生素治疗开始前采取标本。根据炭疽病例的不同型别酌情采集病灶标本。
1、皮损部位标本的采集：皮肤炭疽水泡期时，注意无菌操作，以无菌棉签从未破溃水泡内沾取水泡液（水泡期内以革兰氏染色法较易发现炭疽杆菌）；在结痂期时，收集焦痂组织时需小心提起外层的焦痂组织，以无菌棉签取焦痂组织转动棉签2～3s，以保证有足够的标本。
2、血培养：无菌条件下采集全血5～10ml。
3、粪便：运送大便标本应注意放置在清洁、干燥，无菌和密闭的容器内，标本应大于5g。对部分无法收集粪便标本的患者，可以肛试子插入肛门1英寸采取标本。
4、痰培养：收集痰标本应大于1ml，应以无菌密封容器运送。无痰液者，应取培养基、打开平皿盖，将积液置于距离患者口鼻10cm处；令患者对平皿咳嗽，然后迅速盖上平皿。
5、其他体液标本：胸腔积液或脑脊液等标本，按照规定的程序穿刺取得。
6、尸体标本：患者死于炭疽时，可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质脏器获得组织标本。
[标本运输及储存]
1、拭子：室温直接运输至实验室，如运输时间超过1h，在2～8℃运输。
2、粪便：1h内运输新鲜大便至实验室，如运输时间超过1h，在2～8℃运输。
3、痰液：以无菌有盖的容器常温运送，如运输时间超过1h，在2～8℃运输。
4、血培养标本：室温直接运输至实验室。
[标本培养的操作]
按标准操作程序进行。
所有污染的和陈旧的标本，均应首先制成悬液。根据标本中含炭疽杆菌量的多少，可将悬液适当稀释，或经自然沉淀除去粗大沉淀物后，再以10000g/min离心5min，取富集的沉淀物。将所得的悬液沸水浴加热15min后涂布平板。
培养过程：适宜温度35℃～37℃；环境气体：洁净空气或少量CO2。培养周期，至少培养3天，每日观察，在培养18～24h内即可开始观察，少数炭疽杆菌在培养8h后即生长。
菌落特点：一般在SBA培养平板培养15～24h，生长完好的菌落大约直径2～5mm。菌落呈平或不规则的突起，边缘略不规则，毛玻璃外观，菌落边缘有“逗号”形，显微镜下观察边缘呈明显“狮头样”菌落。
血平板上炭疽杆菌不溶血，过度生长的菌落有轻微溶血，但与β溶血链球菌有明显区别。
需对照观察在SBA和MAC培养基的生长，因炭疽杆菌在SBA培养基生长良好而在MAC培养基不生长。
炭疽杆菌生长迅速，接种浓度高的局部，6～8h可以看到菌落生长，个别或可在12～15h内看到菌落生长，利用这一特性，可以将炭疽杆菌与其它生长较慢的细菌进行区分。
炭疽杆菌鉴定：
含上述可疑菌落取出，划线接种于平板之上，在划线区内一处滴1滴诊断用炭疽噬菌体，另一处贴一片青霉素纸片。37℃孵育8～24h后，在噬菌体处有透明噬菌斑，青霉素纸片周围有明显的抑菌环，便可判定接种物为炭疽杆菌。
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