5．1．5．3．2 测定
1)色谱条件：C18硅胶色谱柱，250mm×4．6mm，5μm粒径，柱温32℃。
2)洗脱液：0．1％三氟乙酸溶液(5．1．2．5)为洗脱液A，甲醇(5．1．2．1)为洗脱液B。
3)洗脱梯度：见表1。
表1 洗脱梯度
┌──┬────┬──────┬─────┬─────┐
│序号│时间min │流量mL／min │洗脱液A％ │洗脱液B％ │
├──┼────┼──────┼─────┼─────┤
│1 │—— │1．00 │100．0 │0．0 │
├──┼────┼──────┼─────┼─────┤
│2 │16．00 │1．00 │86．8 │13．2 │
├──┼────┼──────┼─────┼─────┤
│3 │16．50 │1．50 │100．0 │0．0 │
├──┼────┼──────┼─────┼─────┤
│4 │30．00 │1．00 │0．0 │100．0 │
└──┴────┴──────┴─────┴─────┘
4)测定：利用洗脱液A和洗脱液B的混合液(50：50)，以1mL／min的流速平衡色谱系统。注入20μL～50μL的3mol／L盐酸溶液平衡柱子，以检测溶剂的纯度。注入10μL待测溶液测定糠氨酸含量。每测定10个样品后测定一次标准工作溶液(5．1．2．7)，以校准仪器。糠氨酸的出峰时间应该在8min～10min(参见附录A和附录B)。
5．1．6 结果计算
糠氨酸含量以样品质量分数W计，数值以每100g蛋白质中所含毫克数表示，按如下公式计算：
b×D
W＝---------×100……………………(1)
m
式中：
W——样品中每100g蛋白质中糠氨酸的含量，单位为毫克(mg)；
b——样品水解液中糠氨酸浓度，单位为微克每毫升(μg／mL)；
D——测定时稀释倍数(D＝6)；
m——样品水解液中蛋白质浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)。
计算结果精确到小数点后一位。
5．1．7 精密度
在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％。
5．2 乳果糖含量的测定
5．2．1 原理
牛奶在加热处理过程中，部分乳糖异构为乳果糖，经β—D—半乳糖苷酶水解后生成半乳糖和果糖，通过酶法测定产生的果糖量计算牛乳中乳果糖含量。
5．2．2 试剂与材料
