４．结果报告
４．１ 被检样品培养物，经证实为革兰氏阴性杆菌、氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告检出绿脓杆菌。
４．２ 若氧化酶试验阳性的革兰氏阴性杆菌的培养物，绿脓菌素试验为阴性时，硝酸盐还原产气试验，４２℃生长试验及明胶液化试验皆为阳性，亦应报告检出绿脓杆菌。
４．３ 与４．１及４．２的结果不符时，报告未检出绿脓杆菌。
表７： 绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌的主要特性鉴别表
┌────────┬──┬────────┬──┬─┬─┬──┬─┬──┬─┬──┐
│＼ │分离│ 色素 │ 鞭 │氧│氧│ 乙 │精│硝酸│液│42℃│
│ ＼ 鉴 ├──┼──┬──┬──┤ 毛 │化│化│ 酰 │氨│盐还│化│ 生 │
│ 菌 ＼ 别 │十六│ 绿 │ 萤 │ 其 │ 染 │葡│酶│ 氨 │酸│原产│明│ 长 │
│ ＼ │烷三│ 脓 │ 光 │ 他 │ 色 │萄│ │ 酶 │双│气 │胶│ 试 │
│ ＼ 培 │甲基│ 菌 │ 色 │ 色 │ │糖│ │ │水│ │ │ 验 │
│ 种 ＼ 养│溴化│ 素 │ 素 │ 素 │ │ │ │ │解│ │ │ │
│ ＼ │铵琼│ │ │ │ │ │ │ │酶│ │ │ │
│ ＼│脂 │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│绿脓杆菌 │ + │+/- │+/- │+/- │端极│+ │+ │ + │+ │ + │+ │ + │
│(P.aeruginosa) │ │ │ │ │单毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│萤光假单胞菌 │+/- │ - │+/- │ - │端极│+ │+ │-/+ │+ │-/+ │+ │ - │
│(P.fluorescens) │ │ │ │ │多毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│恶臭假单胞菌 │+/- │ - │+/- │ - │端极│+ │+ │-/+ │+ │ + │- │ - │
│(P.putida) │ │ │ │ │多毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│洋葱假单胞菌 │ - │ - │ - │-/+ │端极│+ │+ │-/+ │- │ - │+ │-/+ │
│(P.cepacia) │ │ │ │ │多毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│类鼻疽假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│+ │+ │ - │+ │ - │+ │ + │
│(P.pseudomallei)│ │ │ │ │多毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│嗜麦芽假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│+ │- │ - │- │ - │+ │ - │
│(P.maltophilia) │ │ │ │ │多毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│腐败假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│+ │+ │ - │- │ - │+ │-/+ │
│(P.putrefaciens)│ │ │ │ │单毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│司氏假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│+ │+ │ - │- │ + │+ │+/- │
│(P.stutzeri) │ │ │ │ │单毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│产碱假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│- │+ │ - │- │ - │- │ + │
│(P.alcaligenes) │ │ │ │ │单毛│ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│类产碱假单胞菌 │ - │ - │ - │ - │端极│- │+ │ - │- │ - │- │ + │
│(P.pseudoal- │ │ │ │ │单毛│ │ │ │ │ │ │ │
│caligenes) │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│氧化木糖无色杆菌│ + │ - │ - │ - │周毛│+ │+ │ + │- │ + │- │ + │
│(A.xylosoxidans)│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│产碱杆菌属 │-/+ │ - │ - │ - │周毛│- │+ │-/+ │- │-/+ │- │ + │
│(Alcaligenes. SP│ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
│SP.) │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
├────────┼──┼──┼──┼──┼──┼─┼─┼──┼─┼──┼─┼──┤
│粪产碱杆菌 │ + │ - │ - │ - │周毛│- │+ │ + │- │-/+ │- │ + │
│(Afaecalis) │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │
└────────┴──┴──┴──┴──┴──┴─┴─┴──┴─┴──┴─┴──┘
注“＋／－表示多数阳性，少数阴性。－／＋表示多数阴性，少数阳性。
金黄色葡萄球菌检验法
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属细菌。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤、鼻咽腔、痰液、鼻涕、毛囊等常可发现，故在生产各环节中极易污染药品。本菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。故外用药品和一般眼科制剂规定不得检出金黄色葡萄球菌。
１．培养基、试剂
１．１ 普通肉汤培养基（附录三１）
１．２ 亚碲酸钠北沙参胨水（附录三２７）
１．３ 亚碲酸钠肉汤（附录三２６）
１．４ 卵黄高盐琼脂（附录三２８）
１．５ 甘露醇高盐琼脂（附录三２９）
１．６ 普通肉汤琼脂（附录三２）
１．７ 血浆（１∶１）（附录二４）
２．检验程序
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－
｜ 亚碲酸钠肉汤或 ｜
｜北沙参胨水或普通肉汤 ｜
－－－－－－－－－－－－－
３６±１℃ ↓ ２４小时
－－－－－－－－－
｜卵黄高盐琼脂或｜
｜甘露醇高盐琼脂｜
－－－－－－－－－
３６±１℃ ↓２４～４８小时
－－－－－－－－－－
｜普通肉汤琼脂斜面｜
－－－－－－－－－－
３６±１℃ ↓ ２４小时
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－ －－－－－－－－－
｜革兰氏染色、镜检｜ ｜血浆凝固酶试验｜
－－－－－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－
｜报告｜
－－－－
３．操作步骤
３．１ 增菌培养 取供试液（总则５）１０ｍｌ，接种于备妥的１００ｍｌ亚碲酸钠肉汤或亚碲酸钠北沙参胨水增菌液（滴眼剂、化学药品供试液可接种普通肉汤），置３６±１℃培养２４小时。
含有抑菌成分的滴眼剂等液体制剂，可取样２ｍｌ，采用薄膜过滤法（总则５．３．２），将滤膜分成２片，分别接种２瓶１００ｍｌ上述增菌液中（与绿脓杆菌同时检验时，取样４ｍｌ，过滤后将滤膜剪成４片，分置于二种增菌液４瓶中），其中１瓶加入规定量的对照菌作阳性对照试验，置３６±１℃培养１８～２４小时。若有菌生长，增菌液变混。
３．２ 分离培养 轻微摇动增菌培养液，以接种环沾取１～２环，划线接种于卵黄高盐琼脂或甘露醇高盐琼脂平板，置３６±１℃培养２４～７２小时。
金黄色葡萄球菌在上述平板上的典型菌落形态见表８
表８： 金黄色葡萄珠菌在选择培养基上的菌落特征
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｜ 培 养 基 ｜ 菌 落 形 态 特 征 ｜
｜－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜
｜卵黄高盐琼脂 ｜金黄色，圆形突起，边缘整剂，外周有卵磷脂被分解的乳浊｜
｜ ｜圈。菌落直径１～２ｍｍ ｜
｜－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－｜
｜甘露醇高盐琼脂｜金黄色，圆形突起，边缘整齐，外周有黄色环，菌落直径约｜
｜ ｜１ｍｍ ｜
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金黄色葡萄球菌在上述培养基上产生的色素，典型者为金黄色，但有的菌株可因来源不一或受药物影响，可呈橙黄、黄、白或无色。培养基存放时间和培养时间长短对色素产生亦有影响，一般以新配培养基、培养时间较长，金黄色色素较明显。
上述平板中若无菌落生长，可作出“未检出”报告。若有菌落生长，以接种针轻轻接触疑似菌落中心部位沾取培养物，接种于普通肉汤琼脂斜面，于３６±１℃培养１８～２４小时。一般宜挑取２个以上疑似菌落进行鉴定。
３．３ 革兰氏染色镜检 取普通肉汤琼脂斜面培养物涂片，革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，无芽孢，无荚膜，排列呈不规则、堆积似葡萄状。
３．４ 生化试验
３．４．１ 血浆凝固酶试验 取灭菌小试管３支，每管加入０．５ｍｌ１∶１血浆，吸取待检菌的肉汤培养液（或取肉汤琼脂斜面上的纯菌苔少许在生理盐水管中磨匀，使呈浓菌液）０．５ｍｌ，加入１支血浆管中，其余２支血浆管作对照管，１支加入阳性对照菌的肉汤培养液或菌悬液０．５ｍｌ作阳性对照；另１支加入肉汤或生理盐水０．５ｍｌ作阴性对照。将３管同时放在３６±１℃培养。３小时后开始检查，以后每隔适当时间观察１次，直至２４小时。检查时，轻轻将试管倾斜，仔细观察，凡阴性对照管的血浆流动自如，试验管血浆凝固者为阳性反应；经保温２４小时，试验管无凝固现象为阴性反应。每次试验，阳性对照管应出现血浆凝固，阴性对照管应不凝固。否则，应另制备血浆，重新试验。
４．结果报告
４．１ 供试品中分离培养物为革兰氏阳性球菌，血浆凝固酶试验阳性，报告检出金黄色葡萄球菌。
４．２ 不符合上述试验结果，报告未检出金黄色葡萄球菌
表９： 葡萄球菌属的菌种生化鉴别
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｜ 鉴 别 试 验 ｜金黄色葡萄球菌｜表皮葡萄球菌｜腐生葡萄球菌｜
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｜甘露醇产酸（需氧） ｜ ＋ ｜ ｄ ｜ ｄ ｜
｜甘露醇产酸（厌氧） ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜血凝固酶 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜磷酸酶 ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜
｜耐热ＤＮＡ酶 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜ｄ型毒素 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜核糖醇 ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜甘油 ｜ － ｜ ＋ ｜ ｄ ｜
｜蛋白Ａ ｜ ＋ ｜ － ｜ － ｜
｜新生霉素敏感性 ｜ ＋ ｜ ＋ ｜ － ｜
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ｄ有不同反应结果
破伤风杆菌检验法
破伤风杆菌为梭状芽孢杆菌属细菌，广泛分布于土壤及人、畜的粪便中。本菌的芽孢对热抵抗力很强，湿热１００℃１小时尚能存活，干热１５０℃１小时尚能存活，在尘埃和土壤中可存活１０多年。以根茎类植物为原料的药品常可受到本菌污染，外用药特别是用于深部组织的药品污染破伤风杆菌，可导致破伤风病，死亡率很高。因此，对于某些用于阴道、创伤、溃疡的药品，必须控制破伤风杆菌。
１．培养基、试剂
１．１ ０．１％葡萄糖疱肉培养基（附录三 ３１）
１．２ 新霉素葡萄糖血琼脂（附录三 ３５）
１．３ １％葡萄糖血琼脂（附录三 ３３）
１．４ 革兰氏染色液（附录二 １）
１．５ 厌氧指示剂（附录二 ３）
１．６ 破伤风抗毒素
２．检验程序
@@ ３．操作步骤
３．１ 增菌产毒培养 称取供试品０．５ｇ，共３份，分别加至０．１％葡萄糖庖肉培养基中（如非当日配制，应于临用前煮沸５分钟，迅速冷却），其中一管约加０．０５ｍｌ经３６±１℃厌氧培养２～３天的阳性对照菌液。以上各管均置７５～８０℃水浴保温２０分钟，然后置３６±１℃厌氧培养（厌氧培养箱、罐、袋。或以１∶１凡士林石蜡封盖疱肉培养基液面）７２～９６时，观察结果。若培养液产气、消化碎肉并有臭气，应作革兰氏染色镜检和毒力试验。不产气、无消化碎肉及臭气等现象，镜检未见疑似菌者，可作出未检出破伤风杆菌报告。
