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卫生部办公厅关于印发《全国消除淋巴丝虫病后监测工作方案》的通知

  各级各类医疗机构负责病例的报告和管理。

  附件:1.病原学检测方法(厚血膜法)

  2.血清学检测方法

  3.丝虫病个案调查表

  4.蚊媒分类调查表

  5.蚊媒幼丝虫自然感染调查表

  附件1
病原学检测方法
(厚血膜法)

  一、血片制作

  于晚9时至翌晨2时,以皮肤消毒剂消毒耳垂(或指端)待干,用一次性采血针快速深刺,取血6大滴,约等于120μl,涂于2张玻片,制成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形厚血膜(约长3cm、宽1.5cm),平放于有盖的玻片盒内。

  二、血片染色

  将经自然干燥的血片放入清水中溶血5分钟~10分钟,至血膜呈乳白色,取出晾干,用甲醇固定,染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色,鉴定虫种或保存标本宜用吉氏液或苏木素染色。

  (一)硼砂美蓝染色法。取美蓝2g,硼砂3g,置研钵内,边研边加水,待溶解后冲洗入瓶中,加蒸馏水100ml配成原液,过滤后放置备用。染色时取原液5ml加清水配成5%稀释液,染3分钟~5分钟,使血膜呈天蓝色,然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。

  (二)吉氏染色法。染液由吉氏粉0.5g,中性甘油25ml及甲醇25ml配成。先置染粉于研钵内,加少量甘油充分研磨,边研边加,至甘油加完为止,然后移入带玻璃塞的100ml玻塞瓶内,用甲醇小量多次洗涤甘油染液移入瓶内,盖紧瓶盖,充分摇匀,置于55℃-60℃温箱内24小时或室温下3天-5天,即为原液,放置愈久染色效果愈佳,临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1分钟,然后滴加10%染液(原液加清水稀释配成)染色45分钟,用蒸馏水轻轻冲洗。

  (三)德氏苏木素染色法。染液由A液即铵明矾饱和液(铵明钒20g、蒸馏水100ml)、B液(苏木素结晶1g加纯酒精10ml)、C液(甘油25ml加甲醇25ml)配成。将B液逐滴加入A液中,倒入一不盖紧的容器内,置于空气流通处,经2周至1个月使其充分氧化,过滤后加入C液,密封备用。血片溶血、固定步骤同前。用上述染液染色10分钟~20分钟,用0.05%-0.1%稀盐酸脱色片刻,流水冲洗至血膜呈蓝色。

  三、血片镜检

  将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数,根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征,予以确定。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构,以鉴别班氏和马来微丝蚴。必要时用油镜作进一步鉴别。

  四、班氏与马来微丝蚴形态鉴别要点

特 征

班氏微丝蚴

马来微丝蚴

长度(μm)

244~296(平均260)

177~230(平均220)

宽度(μm)

5.3~7.0

5.0~6.0

体态

柔和,弯曲自然,无小弯

僵直,大弯上有小弯

头端空隙(长宽比)

较短(1 :1)

较长(2 :1)

体核

圆形,排列整齐,各核分开,清晰可数

卵圆形,大小不等,排列紧密,常相互重叠,不易分清

尾核

2个



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