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卫生部关于印发乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法-杯碟法的通知

  4.3.2 生理盐水:8.5g/L。称取8.5g氯化钠,溶解于1000mL水中,121℃高压灭菌15min。
  4.4 标准溶液的配制
  4.4.1 青霉素标准溶液:准确称取适量(精确至 0.1mg)青霉素标准物质(4.2.1),用磷酸盐缓冲溶液(4.3.1)溶解并定容为0.1 mg/mL的标准溶液。当天配制,当天使用。
  4.4.2 β-内酰胺酶标准溶液:准确量取或称取适量β-内酰胺酶标准物质(4.2.2),用磷酸盐缓冲溶液(4.3.1)溶解并定容为16000U/mL的标准溶液。当天配制,当天使用。如果购买的β-内酰胺酶不是标准物质,则应按照附录B方法进行标定后,再配制成16000U/mL的标准溶液。
  4.4.3 舒巴坦标准溶液:准确称取适量(精确至 0.1mg)舒巴坦标准物质(4.2.3),用磷酸盐缓冲溶液(4.3.1)溶解并定容为1 mg/mL的标准溶液,分装后-20℃保存备用,不可反复冻融使用。
  4.5 培养基
  4.5.1 营养琼脂培养基:见第A.1章。
  4.5.2 抗生素检测用培养基Ⅱ:见第A.2章。
  4.6 菌悬液的制备
  将试验菌种(4.1)接种于营养琼脂斜面 (4.5.1)上,经(36±1)℃培养18h-24h,用生理盐水(4.3.2)洗下菌苔即为菌悬液,测定菌悬液浓度,终浓度应大于1×(10的10次方)CFU/mL,4℃保存,贮存期限2周。
  5 主要仪器
  5.1 抑菌圈测量仪。
  5.2 生化培养箱:(36±1)℃。
  5.3 高压灭菌器。
  5.4 培养皿:内径90mm,底部平整光滑的玻璃皿,具陶瓦盖。
  5.5 牛津杯:不锈钢小管,外径(8.0±0.1)mm,内径(6.0±0.1)mm,高度(10.0±0.1)mm。
  5.6 麦氏比浊仪或标准比浊管。
  5.7 pH计
  6 测定步骤
  6.1 样品的制备
  将待检样品充分混匀,取1 mL待检样品于 1.5mL离心管中共4管,分别标为:A、B、C、D,每个样品做三个平行,共12管,同时每次检验应取纯水1 mL加入到1.5mL离心管中作为对照。如样品为乳粉,则将乳粉按1:10的比例稀释。如样品为酸性乳制品,应调节pH值至6-7。
  6.2 检验用平板的制备
  取90mm灭菌玻璃培养皿,底层加10mL灭菌的抗生素检测用培养基Ⅱ(4.5.2),凝固后上层加入5mL含有浓度为1×(10的8次方)CFU/mL的藤黄微球菌CMCC(B)28001抗生素检测用培养基Ⅱ (4.5.2),凝固后备用。


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